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RIPA裂解液是一种传统的细胞组织快速裂解液。RIPA裂解液裂解得到的蛋白样品可以用于常规的Western、IP等。RIPA的本意是Radio Immunoprecipitation Assay。RIPA裂解液的配方有很多种，根据其裂解液的强度大致可以分为强、中、弱三类。

用RIPA裂解液裂解得到的蛋白样品，可以用我司生产的BCA蛋白定量试剂盒(LA10948)测定蛋白浓度。本产品由于含有较高浓度的去垢剂，不能用Bradford法测定由本裂解液裂解得到样品的蛋白浓度。本产品配有一支浓度为100mM的PMSF(1.5mL)，一般建议使用浓度为1mM。

组分	规格
RIPA裂解液(中)	100mL
100mM PMSF	1.5mL
说明书	1份

保存：RIPA裂解液保存于2～8℃，PMSF保存于-20℃。


50mM Tris (pH7.4)，150mM NaCl，1% NP-40，0.5% sodium deoxycholate，0.1% SDS，EDTA等。

• 为取得最佳的使用效果，尽量避免过多的反复冻融，可以适当分装后使用。
  
• 用户使用前需加入蛋白酶抑制剂，如PMSF。PMSF可抑制丝氨酸蛋白酶，例如trypsin和chymotrypsin，也可抑制半胱氨酸蛋白酶和乙酰胆碱酯酶。根据需要可再加入Leupeptin，Aprotinin等其它抑制剂，也可以直接加入蛋白酶抑制剂混合物(货号：LA10933)。
  
• 裂解液中含有SDS易沉淀析出，使用前应该37℃水浴重新溶解完全后恢复到室温使用。
  
• 裂解样品的所有步骤都需在冰上或4℃进行。
  
• 本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
  
• 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

• 对于培养细胞样品：
  
  • 融解RIPA裂解液，混匀。取适当量的裂解液，在使用前数分钟内加入PMSF，使PMSF的最终浓度为1mM。
    
  • 对于贴壁细胞：去除培养液，用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍(如果血清中的蛋白没有干扰，可以不洗)。按照6孔板每孔加入150～250微升裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液接触细胞1～2秒后，细胞就会被裂解。
    对于悬浮细胞：离心收集细胞，用手指把细胞用力弹散。按照6孔板每孔细胞加入150～250微升裂解液的比例加入裂解液。再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多，必须分装成50～100万个细胞/管，然后再裂解。
    
  • 充分裂解后，10000～14000g离心3～5分钟，取上清，即可进行后续的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。
    裂解液用量说明：通常6孔板每孔细胞加入150微升裂解液已经足够，但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到200微升或250微升。
• 对于组织样品：
  
  • 把组织剪切成细小的碎片。
    
  • 融解RIPA裂解液，混匀。取适当量的裂解液，在使用前数分钟内加入PMSF，使PMSF的最终浓度为1mM。
    
  • 按照每20毫克组织加入150～250微升裂解液的比例加入裂解液(如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液，如果需要高浓度的蛋白样品，可以适当减少裂解液的用量)。
    
  • 用玻璃匀浆器匀浆，直至充分裂解。
    
  • 充分裂解后，10000～14000g离心3～5分钟，取上清，即可进行后续的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。
    
  • 如果组织样品本身非常细小，可以适当剪切后直接加入裂解液裂解，通过强烈vortex使样品裂解充分。然后同样离心取上清，用于后续实验。直接裂解的优点是比较方便，不必使用匀浆器，缺点是不如使用匀浆器那样裂解得比较充分。

RIPA裂解液的裂解产物中经常会出现一小团透明胶状物，属正常现象。该透明胶状物为含有基因组DNA等的复合物。在不检测和基因组DNA结合特别紧密的蛋白的情况下，可以直接离心取上清用于后续实验；如果需要检测和基因组结合特别紧密的蛋白，则可以通过超声处理打碎打散该透明胶状物，随后离心取上清用于后续实验。如果检测一些常见的转录因子，例如NF-kappa B、p53等时，通常不必进行超声处理，就可以检测到这些转录因子。若用于特定用途需要自行添加特定抑制剂或不需要添加抑制剂，对于特定的酶或生物小分子的检测是否兼容需要自行测试，我司不提供具体的应用信息。
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