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产品目录

RIPA裂解液(中)图片
产品货号:
LA10922
中文名称:
RIPA裂解液(中)
英文名称:
RIPA Lysis Buffer
产品规格:
100mL
发货周期:
1~3天
产品价格:
询价

RIPA裂解液是一种传统的细胞组织快速裂解液。RIPA裂解液裂解得到的蛋白样品可以用于常规的Western、IP等。RIPA的本意是Radio Immunoprecipitation Assay。RIPA裂解液的配方有很多种,根据其裂解液的强度大致可以分为强、中、弱三类。



用RIPA裂解液裂解得到的蛋白样品,可以用我司生产的BCA蛋白定量试剂盒(LA10948)测定蛋白浓度。本产品由于含有较高浓度的去垢剂,不能用Bradford法测定由本裂解液裂解得到样品的蛋白浓度。本产品配有一支浓度为100mM的PMSF(1.5mL),一般建议使用浓度为1mM。




组分规格
RIPA裂解液(中)100mL
100mM PMSF1.5mL
说明书1份

保存:RIPA裂解液保存于2~8℃,PMSF保存于-20℃。


50mM Tris (pH7.4),150mM NaCl,1% NP-40,0.5% sodium deoxycholate,0.1% SDS,EDTA等。


  • 为取得最佳的使用效果,尽量避免过多的反复冻融,可以适当分装后使用。
  • 用户使用前需加入蛋白酶抑制剂,如PMSF。PMSF可抑制丝氨酸蛋白酶,例如trypsin和chymotrypsin,也可抑制半胱氨酸蛋白酶和乙酰胆碱酯酶。根据需要可再加入Leupeptin,Aprotinin等其它抑制剂,也可以直接加入蛋白酶抑制剂混合物(货号:LA10933)。
  • 裂解液中含有SDS易沉淀析出,使用前应该37℃水浴重新溶解完全后恢复到室温使用。
  • 裂解样品的所有步骤都需在冰上或4℃进行。
  • 本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
  • 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。



  • 对于培养细胞样品:
    • 融解RIPA裂解液,混匀。取适当量的裂解液,在使用前数分钟内加入PMSF,使PMSF的最终浓度为1mM。
    • 对于贴壁细胞:去除培养液,用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍(如果血清中的蛋白没有干扰,可以不洗)。按照6孔板每孔加入150~250微升裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下,使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液接触细胞1~2秒后,细胞就会被裂解。
      对于悬浮细胞:离心收集细胞,用手指把细胞用力弹散。按照6孔板每孔细胞加入150~250微升裂解液的比例加入裂解液。再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多,必须分装成50~100万个细胞/管,然后再裂解。
    • 充分裂解后,10000~14000g离心3~5分钟,取上清,即可进行后续的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。
      裂解液用量说明:通常6孔板每孔细胞加入150微升裂解液已经足够,但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到200微升或250微升。
  • 对于组织样品:
    • 把组织剪切成细小的碎片。
    • 融解RIPA裂解液,混匀。取适当量的裂解液,在使用前数分钟内加入PMSF,使PMSF的最终浓度为1mM。
    • 按照每20毫克组织加入150~250微升裂解液的比例加入裂解液(如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液,如果需要高浓度的蛋白样品,可以适当减少裂解液的用量)。
    • 用玻璃匀浆器匀浆,直至充分裂解。
    • 充分裂解后,10000~14000g离心3~5分钟,取上清,即可进行后续的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。
    • 如果组织样品本身非常细小,可以适当剪切后直接加入裂解液裂解,通过强烈vortex使样品裂解充分。然后同样离心取上清,用于后续实验。直接裂解的优点是比较方便,不必使用匀浆器,缺点是不如使用匀浆器那样裂解得比较充分。



RIPA裂解液的裂解产物中经常会出现一小团透明胶状物,属正常现象。该透明胶状物为含有基因组DNA等的复合物。在不检测和基因组DNA结合特别紧密的蛋白的情况下,可以直接离心取上清用于后续实验;如果需要检测和基因组结合特别紧密的蛋白,则可以通过超声处理打碎打散该透明胶状物,随后离心取上清用于后续实验。如果检测一些常见的转录因子,例如NF-kappa B、p53等时,通常不必进行超声处理,就可以检测到这些转录因子。若用于特定用途需要自行添加特定抑制剂或不需要添加抑制剂,对于特定的酶或生物小分子的检测是否兼容需要自行测试,我司不提供具体的应用信息。
相关搜索:RIPA裂解液(中)RIPA裂解液细胞组织裂解液细胞组织快速裂解液RIPA Lysis Buffer
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